(一)無菌操作前的準備工作
培養材料接種時的無菌操作過程除上述各項操作外,還需完成以下無菌操作步驟,從而獲得接種的無菌培養材料。
工作人員無菌操作前需用肥皂刷洗雙手及手臂,并用流水沖凈,并對手臂**后穿戴好**工作服、工作帽和口罩,更換拖鞋,才能進入無菌操作區。如進入層流操作室進行實驗操作,應完成緩沖準備區內的淋浴、一次更換**衣帽、拖鞋;手臂**、二次更換**防護衣帽、手套、拖鞋等;再在風淋區進行無菌風淋后方可進入層流操作室。進入無菌操作區后,再用70%~75%的酒精擦拭雙手和前臂,完成無菌操作準備工作。
用70%~75%酒精擦洗工作臺面后,將已****的實驗用品取出,并將操作器械放置在無菌器械支架上,然后開始實驗操作。在實驗操作過程中,對所有操作器械每次使用后都要進行**,常采用酒精燈火焰灼燒**。
(二)無菌操作步驟
準備工作完成后,對來自于自然生長條件下的外植體,按上述培養材料**方法**后取出,放入已**的培養皿中,然后置超凈工作臺酒精燈火焰下方,用**剪刀等器械進行適當分離、切割或其它處理后備用。
在酒精燈火焰處將培養容器的瓶塞(蓋)輕輕打開,瓶口在燈焰處旋轉灼燒,用鑷子將培養材料置入培養液上,將鑷子在酒精瓶中浸蘸酒精,置酒精燈上灼燒后放回支架,然后迅速灼燎瓶塞(蓋)數秒后塞回瓶口。對繼代培養材料的無菌操作,需在燈焰處打開瓶塞(蓋),繼代材料為液體培養細胞時直接用**吸管吸取培養細胞液放入新培養液中;繼代材料為固體培養細胞時用**鑷子挑取適量材料置新培養液上;繼代材料為其他組織時,用**剪刀或其他器械進行培養材料適當切割后,用**鑷子將其置于新培養液上(中),然后迅速灼燎瓶塞(蓋)數秒后塞回瓶口。